菲羅門 Chiral 多糖型手性柱的使用及維護
一、手性固定相一覽表
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正相涂敷型固定相 |
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Chiral ND,ND(2), NQ(2),NS(2),NT(2),NX(2), NY(2),NZ(2), MB(2), MC(2), MF(2), MG(2), MD,MD(2),MJ(2),MQ(2),MX(2), MZ(2) |
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正相鍵合型固定相 |
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Chiral INA, INB, INC, INJ |
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反相涂敷型固定相 |
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Chiral ND(2)-RH, NQ(2)-RH, NS(2)-RH,NX(2)-RH, NY(2)-RH,NZ(2)-RH,MD(2)-RH, MJ(2)-RH,MQ(2)-RH,MX(2)-RH, MZ(2)-RH |
二、常用優(yōu)化峰形的添加劑的選擇（正相，反相，SFC 都可使用）
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酸性樣品 |
堿性樣品 |
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常規(guī)一般使用 |
三氟乙酸，甲酸 (0.1%-0.5%) |
二乙胺 (0.1%-0.5%) |
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考慮繼續(xù)調(diào)整峰形使用 |
甲磺酸 (0.1%) |
三乙胺、乙醇胺、正丁胺 (0.1%-0.5%) |
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特別需要時，酸性與堿性添加劑可以同時添加，建議各 0.1% |
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添加劑適合正相以及 SFC 超臨界流體，以及反相（反相應(yīng)用時，建議 0.05%-0.1%） |
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三、正相涂敷型手性固定相常用起始條件
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１ |
2 |
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起始條件 |
HEX:IPA=80:20 |
HEX:EtOH=80:20 |
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調(diào)整范圍 |
HEX 99%至 50%之間 |
HEX 99%至 50%之間 |
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HEX:正己烷，IPA:異丙醇，EtOH:無水乙醇 |
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HEX 比例增加，保留時間會變長 |
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IPA 與 EtOH 一般比例不超過 50%，遇到極性特別大的樣品，允許最高至 95%，正常 情況控制在 50%以下 |
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起始柱溫為 25℃，起始流速建議在 0.8ml/min 左右。有條件的情況下，溫度在 5-25℃ 內(nèi)調(diào)整，對分離度可能產(chǎn)生大的影響。溫度低有時利于拆分，溫度高，出峰快，峰形 可能更尖銳 |
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Chiral MF(2), Chiral MG(2)流動相中不能用乙醇 |
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正相涂敷型手性固定相不能接觸下列溶劑：甲基叔丁基醚(MtBE)，二氯甲烷(DCM)， 四氫呋喃(THF)，乙酸乙酯(EtOAc)，氯仿(CHCl3)，丙酮等 |
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１ |
２ |
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起始條件 |
HEX:IPA=80:20 |
HEX:EtOH=80:20 |
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調(diào)整范圍 |
HEX 99%至 50%之間 |
HEX 99%至 50%之間 |
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3 |
4 |
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起始條件 |
MtBE:EtOH=98:2 |
HEX:DCM=50:50 |
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調(diào)整范圍 |
MtBE 98%至 60%之間 |
HEX 85%至 50%之間 |
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5 |
6 |
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起始條件 |
HEX:THF=70:30 |
HEX:EtOAc=50:50 |
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調(diào)整范圍 |
HEX 99%至 70%之間 |
HEX 99%至 50%之間 |
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7 |
8 |
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起始條件 |
HEX:CHCl3=30:70 |
ACN:IPA(或 MeOH)＝100:0 |
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調(diào)整范圍 |
HEX 60%至 100%之間 |
ACN 100%至 90%之間 |
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HEX 比例增加，保留時間會變長 |
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除了上述溶劑，溶解與洗脫的必要性下，丙酮以及 1,4 二氧六環(huán)也可使用 |
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起始柱溫為 25℃，起始流速建議在 0.8ml/min 左右。有條件的情況下，溫度在 5-25℃ 內(nèi)調(diào)整，對分離度可能產(chǎn)生大的影響。溫度低有時利于拆分，溫度高，出峰快，峰形 可能更尖銳 |
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五、反相手性固定相常用起始條件
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酸性及兩性化合物 |
堿性化合物 |
中性化合物 |
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水相 40% |
0.1%甲酸水 |
0.1% TFA |
水 |
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0.1% TFA 水 |
PH=2 100mM 高 氯酸鈉水溶液 |
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PH=2.5 50mM 磷酸 緩沖鹽 |
PH=2.5 100mM 六 氟磷酸鉀水溶液 |
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0.1%磷酸水 |
20mM 碳酸氫銨水 溶液（PH=9） |
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PH=2 100mM 高 氯 酸鈉水溶液 |
20mM 碳酸氫銨水溶液（PH=9），含0.1% DEA |
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PH=2 100mM 六 氟 磷酸鉀水溶液 |
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有機相 60% |
ACN, MeOH, IPA |
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常規(guī)清洗 |
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HEX:IPA=80:20 0.4ml/min 1-2 小時并直接保存 |
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柱效下降，峰形不正常時可能的特殊殘留物清洗，再生 |
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酸性殘留 |
堿性殘留物 |
性質(zhì)不確定的殘留物 |
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EtOH(0.1% DEA) 0.2ml/min 2 小 時 |
EtOH(0.1% TFA) 0.2ml/min 2 小 時 |
第 1 步 EtOH(0.1% TFA) 0.2ml/min 2 小 時 |
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第 2 步 EtOH(0.1% DEA) 0.2ml/min 2 小 時 |
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清洗完畢后，再用 HEX:IPA=80:20 0.4ml/min 1 小時，并按 COA 測試后直接保存 |
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EtOH 不適用于 Chiral MF(2)與 Chiral MG(2)固定相。Chiral INB, INC 可用 EtOAc 再生 |
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說明：如果是柱頭堵塞與污染，可以 0.2ml/min 流速倒沖 |
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七、反相涂敷型與鍵合型手性柱的清洗與保存
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常規(guī)清洗 |
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ACN:H2O=10:90 0.5ml/min 1 小時，ACN:H2O=90:10 0.5ml/min 1 小時,保存于 ACN:H2O=75:25（或 60:40）體系中 |
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柱效，柱壓，峰形問題時，特殊殘留物的清洗，再生 |
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第１步：MeOH:H2O=10:90(含 0.1% TFA ) 0.2ml/min 1 小時 |
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第２步：MeOH:H2O=90:10(含 0.1% TFA ) 0.2ml/min 1 小時 |
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第３步：MeOH:H2O=99:1(含 0.1% TFA ) 0.2ml/min 2 小時 |
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第 4 步：ACN:H2O=75:25 0.5ml/min 30 分鐘，并按 COA 測試后直接保存 |
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說明：如果是柱頭堵塞與污染，可以 0.2ml/min 流速倒沖 |
八、手性色譜柱啟用與切換的注意
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所有正，反相手性柱啟用時，建議流動相下 0.2ml/min 流速先運行 10 分鐘，再提升到 0.5ml/min 流速運行 5 分鐘，再提升到需要運行的流速 |
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正相涂敷型與鍵合型手性柱，都可以在正相體系，SFC 體系(甲醇與液態(tài)二氧化碳體系) 以及 PO 極性體系（純 ACN 或純 MeOH 為流動相，或者含 5%的 IPA）切換使用。從一種體系切換到另一種體系時，需用 20 倍柱體積的 IPA 以 0.2ml/min 沖洗以切換。按 250*4.6mm 柱計算，20 倍柱體積約 50ml |
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鍵合型手性柱，出廠在正相體系中，如果要轉(zhuǎn)化為反相柱使用，需用 20 倍柱體積的 IPA 以 0.2ml/min 沖洗后，再用反相體系沖洗轉(zhuǎn)化為反相柱，之后按反相柱的操作進 行。一旦轉(zhuǎn)化為反相手性柱，則不能再切換回正相 |
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適用 PH 范圍為 2-９ |
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適用溫度范圍為 0-40℃ |
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適用壓力上限為 300bar |
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可供應(yīng)色譜柱，制備柱產(chǎn)品的粒徑為 3u, 5u, 10u，內(nèi)徑為 2.1mm, 3.0mm, 4.6mm,10mm, 21.2mm, 30mm, 50mm，長度為 50mm, 100mm, 150mm, 250mm |
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可供應(yīng)的填料粒徑為 10u |
十、一些溶劑的UV 截止波長
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溶劑 |
UV 截止波長 |
溶劑 |
UV 截止波長 |
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HEX |
200nm |
IPA |
205nm |
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EtOH |
210nm |
MeOH |
205nm |
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ACN |
190nm |
H2O |
小于 190nm |
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DCM |
233nm |
EtOAc |
256nm |
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MtBE |
210nm |
THF |
212nm |
